脂质体作为药物载体具有多样性‚脂溶性药物和水溶性药物都能以较高的浓度载入脂质体中‚且脂质体‚毒性低，生物相容性好‚其作为药物载体已被广泛研究。在一些治疗领域中‚脂质体已经成功用于药物的缓控释和定位传递。已上市的注射用脂质体制剂有AmBisome两性霉素脂质体、DaunoXome柔红霉素脂质体、Myocet多柔比星脂质体、Doxil多柔比星隐形脂质体、DepoCyt阿糖胞苷多囊泡脂质体以及 DepoDur硫酸吗啡多囊泡脂质体等‚还有很多脂质体制剂已进入临床研究阶段。为保证产品的质量和使用时的安全性‚用 于注射的脂质体较终需要经过灭菌步骤或者无菌操作过程‚这就使其大规模生产复杂化。脂质体的 物理和化学不稳定性‚使灭菌成为注射用脂质体产业化的难点。现根据近几年的研究‚综述脂质体可能适用的几种灭菌方法或无菌操作。
1 脂质体的不稳定性
1.1 化学不稳定性 即使在没有特异的氧化剂存在下‚磷脂的脂肪酸链也能被痕量的过渡金属、辐射或者声裂催化氧化。脂质的不饱和度越高越易氧化形成自由基。脂质氧化会影响脂质和脂质体的性质‚使双分子层的流动性增加。磷脂易于水解‚特别是在水分散相中‚脂质水解成游离脂肪酸与2-酰基和3-酰基溶血磷脂。
1.2 物理不稳定性 脂质体易发生的物理变化包括聚集或融合、沉淀、药物损失。这些不稳定性能被化学变化诱导的双分子层缺陷‚被加热、冷冻以及相转变等物理因素所诱发。
2 灭菌
2.1 高压灭菌
脂质体的高压灭菌存在着脂质体或包封药物的物理和化学变化‚以及包封药物损失的风险。
制备不同脂质组成的多种脂质体‚并将其在121℃下灭菌20min。观察发现‚在生理盐水中热力灭菌后脂质体发生聚集‚而在等渗的糖或者多元醇溶液中则不聚集。含有高过氧化值的蛋黄磷脂（EggPC）的脂质体分散相‚在热力灭菌后略显淡黄色‚而使用低过氧化值的蛋黄磷脂、氢化卵磷脂（HSPC）或者二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）则无颜色变化。在中性pＨ下通氮气也能防止颜色变化。在热力灭菌过程中‚带阴离子的6-羧基荧光素从负电荷脂质体中泄漏‚而其在热力灭菌和长期储存过程中都未从正电荷脂质体中泄漏。因此‚若由低过氧化值的脂质形成的荷电脂质体分散在pH接近6.5的等渗的糖或多元醇溶液中‚溶液中溶解氧的量降到较低‚且若是离子型水溶性药物则包载在带相反电荷的脂质体中‚则对其进行热力灭菌是可行的。
2.2 过滤灭菌
过滤灭菌仅适合于粒径在200nm以下的脂质体以及低粘度的分散相，且需较高的压力。也有文献报道在高于相变温度下过滤‚由于脂质膜在液晶态下柔性增加‚大于0．2μm的脂质体也能滤过。将包载羧基荧光素的多室脂质体移除游离药物‚且经过0.1、0.2或0.4μm孔径的聚碳酸酯膜使粒径均匀化后，采用塑料注射器使其通过由聚碳酸酯、醋酸纤维素或聚偏氟乙烯构成的消毒过滤器。脂质体易于滤过‚且粒径无显著变化‚也无磷脂损失。包载物的泄漏很轻微，低于5%，除了粒径300nm的脂质体滤过0.2μm聚碳酸酯膜时泄漏率大于5%。
以冷冻干燥单相溶液的新方法制备脂质体。将脂质和水溶性载体材料溶解在叔丁基醇／水共溶剂中‚形成均匀的单相溶液‚将形成的溶液通过0.2μm的滤器过滤灭菌‚然后低压冻干。加入水后‚冻干制品可自发形成均匀的脂质体制剂。采用该方法可制备无菌无热原的具有狭小粒度分布的亚微粒脂质体。
2.3 γ辐照灭菌
γ辐照是脂质体的可以选择的灭菌方法‚其主要问题在于可能引起脂质和药物的辐射损伤以及产生毒理学方面的问题。
将平均粒径为0.2μm的脂质体‚在氮气气氛中以高达5×104Ｇｙ的剂量辐照灭菌。 （DPPC:DPPG 10:1）的脂质体和（DEPC∶DEPG 10:1）的脂质体在不含海藻糖的10mmol/L磷酸盐缓冲液中（pH7.4）‚经γ辐照后大量降解。而在含10%海藻糖作为冻干保护剂条件下‚辐射损伤减少。但是海藻糖与γ辐照的诱导产物反应‚导致pH值大大下降‚因而限制了冷冻或冷冻干燥脂质体分散相作为降低辐射损伤的方法的使用。γ辐照后脂质体的粒径没有发生变化‚双分子层的刚性也几乎无变化。在10％海藻糖存在下‚（DPPC:DPPG 10:1）脂质体的相变温度在γ辐照前后差异很小‚但在无海藻糖的情况下差异变大。2.4 无菌操作 当上述方法都不适用时‚如对热敏感的脂质体‚则应进行无菌操作。
多囊脂质体在结构上不同于常规脂质体‚内部脂膜以非同心圆形式存在，外观像泡沫，粒径更大（5～100μm‚中间粒径为10～30μm）‚不适合于终端灭菌‚因此在制备时必须要无菌操作。制备多囊脂质体的第一步是将含有药物的第一水相与含有脂质的有机溶剂进行混合乳化‚形成水包油型乳剂。第二步‚将初乳与第二水相机械混合形成混悬在第二水相内的溶剂小球。第三步‚通过蒸发、减压或者氮气流移除小球中的有机溶剂‚形成了MVL。较后再通过交叉流滤过交换缓冲液‚除去未包封的药物。
2.5 其他灭菌方法
将制得的碘曲仑脂质体低压冻干后用环氧乙烷灭菌。在冻干前加入冻干保护剂‚以保 持脂质体的粒径。当每克脂质采用4g海藻糖时‚冻干和灭菌对样品的形态学性质无不利影响。灭菌后7d‚在任何样品中均无微生物生长。
气动挤出器
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